歡迎訪問廈門鱟試劑生物科技股份有限公司官網

特異性鱟試劑及其鑒定

發布時間:2012-01-20
分享到:

特異性鱟試劑系我公司國內首創產品(又叫棄G因子鱟試劑或特異性檢測內毒素試劑,TAL-ES-Test)。

六十年代美國的Levine和Bang發現革蘭氏陰性菌內毒素可以迅速地引起鱟血細胞裂解液形成凝固,從而開發了靈敏度和特異性都非常高的檢測內毒素的鱟試驗法,此法已廣泛被各國所采用,但在使用鱟試劑過程中有時發現假陽性反應(或叫非內毒素引起的凝膠反應),給鱟試驗法的應用帶來問題。為解決上述假陽性問題,八十年代以后進行了很多研究和改進。

1981年Kakinuma發現一種抗癌藥(1-3)β-D-glucan(β-葡聚糖)能使鱟試劑凝固,該物質廣泛存在于擔子菌、真菌、地衣類、酵母和藻類的菌體成分中,在10ng/ml時,就可使鱟試劑凝固。另外,某些人造纖維制造的人工腎透析膜上也含有類似的物質,干擾鱟試驗,但它不引起家兔升溫。

隨后,日本學者陸續發現并純化凝固酶原、凝固蛋白原、B因子、C因子、G因子、抗脂多糖因子等,詳細闡明了鱟試驗機理如下:

鱟試劑原理.jpg

為排除(1-3)β-D-glucan激活G因子這一旁路的干擾,使鱟試劑專一對內毒素起反應,日本學者小林于1985年用鱟凝固酶重組法,1990年土谷提出用羧甲基Curdlan封閉法等制造特異性內毒素試劑。

我廠在多年研究的基礎上(見1987年第六期《現代應用藥學》),1995年春批量生產出新一代特異性鱟試劑投放市場,這種鱟試劑專一對內毒素起反應,不對(1-3)β-D-glucan起反應,在檢測藥品、生物制品及臨床血液樣品時,避免假陽性出現,使檢測更加準確、可靠。

為方便用戶,除原配套內毒素工作品外,還配套(1-3)β-D-glucan供作G因子旁路檢測對照。方法如下:

blob.png

注:假定所用的二種鱟試劑靈敏度都系0.125 Eu/ml,先用溶解液溶解,各管分別加0.1ml,再加內毒素0.1ml,空白對照0.1ml(1-3)β-D-glucan,混勻,在37℃水浴放孵1h,取出判斷結果,應如上表,即全成份鱟試劑空白管出現陽性,因為它含有G因子,被(1-3)β-D-glucan激活,形成凝膠。特異性鱟試劑則不受(1-3)β-D-glucan激活,不形成凝膠,只專一對內毒素起反應。

特異性鱟試劑的鑒定:

分別取0.1mlβ-葡聚糖加入已經復溶好的0.1ml普通鱟試劑或特異性鱟試劑中(注:普通鱟試劑與特異性鱟試劑靈敏度應相同)混勻,在37±1℃放孵1h,取出判斷結果。普通鱟試劑出現陽性,因為它的G因子旁路被β-葡聚糖激活,形成凝膠;特異性鱟試劑不受β-葡聚糖激活,只對內毒素起專一反應,不形成凝膠。